Qkine FGF2-G3介绍

FGF2-G3是FGF-2的高度生物活性和热稳定（耐热）的改良型，用于支持同质均匀和可重复的干细胞培养， 同时避免了频繁更换培养基的需要。野生型FGF-2天然不稳定，易于蛋白酶降解和聚集，导致在培养基中的半衰期短（<10小时），需要频繁更换培养基，以及培养过程中的变异。FGF2-G3经过了九个氨基酸替换的改良，以增强稳定性而不影响生物活性。这将蛋白质的功能半衰期从野生型的<10小时提高到培养基中的＞7天（FGF2-G3）。使用热稳定的FGF2-G3提供了一种改良的替代方案，节省了研究人员宝贵的时间和金钱，减少了培养基更换的次数。

Innovation & engineering

FGF2-G3，或称为FGF2-STAB，是由Masaryk大学的Dvorak及其同事利用计算辅助蛋白质工程开发 的，以确定稳定FGF-2的更佳九个氨基酸替换。Qkine从Enantis/Masaryk大学获得了FGF2-G3技术许可，并将该技术与77779193永利的蛋白质制造专业知识结合起来，制造了一种无动物成分、无载体蛋白、无His标签的生长因子，从而实现了从研究到临床或规模化应用的转化。

Qkine FGF2-G3 产品特色

享受休息日无忧的热稳定FGF2-G3干细胞培养。Qkine的FGF2-G3可以在不同的应用中替代野生型FGF-2。它可以作为常见培养基配方（包括mTeSR、StemPRO和E8）的成分之一，用于调节关键细胞过程并维持多能性。

FGF2-G3 的功能与作用

与德国DZNE合作，研究了FGF2-G3在iPSC培养中的效果。使用FGF2-G3的iPSC的稳定性在培养基中进行了72小时的检测，显示出增强的集落健康状态，维持持续增殖状态，无需每日更换培养基（图1）。基于多能性标记物Oct4的表达水平，FGF2-G3也显示出维持多能性的能力，并减少了培养基更换的次数（图 2）。最终，使用FGF2-G3和休息日无忧的细胞培养方法展示了胚胎体的形成（图3）。

1.在不更换培养基的情况下，将iPSCs在mTeSR1培养基中与Qkine FGF2-G3共培养3天。

2.在不更换培养基的情况下，将Oct4+ iPSCs在mTeSR1培养基中与Qkine FGF2-G3共培养5天。

3.在不更换培养基的情况下，将胚胎体在mTeSR1培养基中与Qkine FGF2-G3共培养3天。

Image Credit: Joshua Thomas & Felix Buchner, Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen (DZNE), Germany

每个步骤都进行严格的质量控制

每个Qkine蛋白质均在77779193永利获得ISO9001:2015认证的设施中生产，并在整个过程中采取严格的质量控制 措施。77779193永利对每个批次使用各种分析技术，以确保出色的质量和批次间的一致性。生物活性测定和SDS- PAGE凝胶电泳只是77779193永利用来保证高度生物活性和纯度的一些技术之一。如果您想查看特定批次的完整质量控制数据，请联系77779193永利获取。

FGF2-G3在还原和非还原条件下的SDS-PAGE

通过15%（w/v）SDS-PAGE在还原（+β-巯基乙醇，R）和非还原（ NR）条件下分离纯化的重组蛋白质（3 µg），并用考马斯亮蓝R250染色。在非还原（NR）条件下，重组FGF2-G3迁移为一个主要的17kDa带。在还原（R）条件下，只有17kDa的带可见。未检测到污染蛋白带，突显了蛋白质的纯 度。数据来自Qk053批次＃104340。

热稳定的FGF2-G3在37°C的条件培养基中保持了野生型的生物活性超过7天，这使得干细胞培养具有可重复 性和均一性，并且无需休息日更换培养基。Qkine的每个蛋白质都经过生物活性测试，使用校准的荧光素酶报告基因分析来定义感兴趣蛋白质的完整剂量-反应曲线，并确定其EC50值。

FGF2-G3在培养7天后仍然保持生物活性。野生型FGF-2（Qk027）和FGF2-G3（Qk053）在条件培养基中稀释后， 在37°C下孵育。每天取样，进行序列稀释，然后在转染的HEK293T细胞中进行三重测定。测量了荧光素酶活性， 并进行了对照标准化。

进一步阅读

Dvorak P, Bednar D, Vanacek P, et al. (2018) Computer-assisted engineering of hyperstable fibroblast growth factor 2. Biotechnol Bioeng. 115(4):850-862.

Kuo HH, Gao X, DeKeyser JM, et al. (2019) Negligible-Cost and Weekend-Free Chemically Defined Human iPSC Culture. Stem Cell Reports. 14(2):256-270.

Benington L, Rajan G, Locher C, Lim LY. (2020) Fibroblast Growth Factor 2-A Review of Stabilisation Approaches for Clinical Applications. Pharmaceutics. 12(6):508. 

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