一、介绍

·  同种异体细胞疗法的成功商业化需要优化组织获取和培养之间初始细胞扩增的过程。

·  本文研究者们正在开发一种细胞疗法来治疗腰痛。起始材料是成人椎间盘组织。

·  在这项研究中，研究人员探索了组织在获得后和加工前在低温保存介质中4℃存放的稳定性。随后，研究者探索了使用PBS垂直轮式反应器来加速酶驱动的组织解离。

Figure 1: 制备椎间盘细胞的过程。

(A)获取成人椎间盘组织，并保存在Biolife Hypothermasol低温保存液中；

(B)通过专有的多步骤工艺产生椎间盘细胞；

(C)创建椎间盘细胞冷冻库;发布测试以确保安全性和一致性。

二、实验方法

·  为了评估组织保存的稳定性，将切碎的人髓核组织在Hypothermasol(BioLife Solutions)中在4℃下保存1.5、3.5或5.5天。活/死荧光染色用于观察每个时间点的细胞。然后，酶解分离细胞并将其种在烧瓶里。定期捕获烧瓶的图像以监测细胞贴壁和增殖情况。

·  为了加速组织酶解，将组织放入PBS-0.5垂直轮生物反应器(28-40 RPM,PBS Biotech公司的PBS Mini 0.5L)中运行并监测分离，直到块状物不再可见。

三、结果

·  椎间盘组织在hypothermasol中保存5天后，含有活细胞。5.5天后组织的活/死染色如下图2所示，活细胞染成绿色（图2A）。

·  细胞在每个条件下都能成功生长（图2B）。

Figure 2：(A) 5.5天后组织的活/死染色；(B) 烧瓶上细胞的10倍相差图片。

·  在三个独立的实验中，组织分离的时间从14-20小时减少到不到5小时(图3)。

Figure 3：(A)PBS垂直轮式反应器中组织的酶解作用。(B)在3个样品中，完成组织解离的速度都比以往传统方法解离得快。

四、总结

·  本文中研究者已经确定了重要技术，以提高制造加工的灵活性和效率。这些新方法仍然会在培养过程结束时产生可比量的细胞。

·  研究者正在对培养过程的其他阶段进行优化研究，这可能会影响成本、一致性和质量。

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