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技术上新!MHC Dextramer有效提升低亲和力免疫细胞检测灵敏度
发布时间:2024/08/14 点击数:

在外源微生物、肿瘤蛋白等抗原的刺激下,机体调动T细胞等免疫细胞产生免疫反应以维持机体的稳态。其作用机制为,来自病原微生物或者肿瘤抗原被加工成多肽,这些多肽由抗原提呈细胞APC识别,形成pMHC后呈递给T细胞。T细胞的TCR分别识别pMHC抗原肽以及MHC分子(MHC I和MHC II,CD4+T细胞识别MHC I,CD8+T细胞识别MHC II),从而调动不同的免疫T细胞进行免疫应答。


Dextramer技术通过构建抗原肽MHC的pMHC复合物,帮助全面了解抗原特异性细胞免疫反应,发现、检测表征抗原特异性T细胞,可应用于流式细胞术、单细胞多组学、T细胞治疗等研究领域。


Immudex Dextramer技术


Immudex开发的Dextramer技术基于一条右旋糖酐骨架(Dextramer),在骨架上附着10-20个MHC-抗原肽复合物(pMHC)或其他的免疫受体特异性分子,从而构建出高亲和力的检测分子,包括低亲和力T细胞。此外,每条Dextramer分子上携带了荧光素标签或者DNA条形码信息,从而开展流氏细胞术或单细胞多组学研究。


Immudex Dextramer助力流氏细胞术或单细胞多组学研究


MHC Dextramer 特点

01   Dextran骨架:稳定蛋白质

02   pMHC复合物:增加灵敏性

03   高荧光素:增强荧光分辨率


一、Immudex MHC Dextramer具有高亲和力

不同类型的疾病中,TCRs与其肽/MHC结合的亲和力不同。在疾病中,自身免疫和癌症TCRs的亲和力较低,介于20-500 μM之间,而抗病原体TCRs通常具有较高的亲和力,大约在0.1-10 μM左右。为了验证在不同疾病环境中Dextramer和Tetramer对于高低TCR亲和力表现,对Dextramer和Tetramer进行高亲和力或低亲和力TCR检测研究。


结果1:对于低亲和力TCR,Dextramer不仅可以检测到Tetramer检测到的抗原特异性T细胞,还可以检测到Tetramer无法检测到的抗原特异性T细胞。结果表明,对于低亲和力的T细胞,Dextramer具有的新灵敏度水平能够发现Tetramer无法识别的抗原特异性群体。

结果2:对于高亲和力TCR,Dextramer和Tetramer两者都能够灵敏的检测抗原特异性群体,但流氏分析结果显示,Dextramer染色具有出更好的荧光分辨率。


综合以上结果显示,Dextramer试剂在检测T细胞的TCR亲和力方面显示出较高的灵敏度。


Immudex MHC Dextramer具有高亲和力

图:MHC Dextramer高亲和力性能展示


二、Immudex MHC Dextramer具有高分辨率

为了验证MHC Dextramer的分辨率,分别对比了Dextramer和Tetramer结合HLA-A*0201分子后的PE荧光检测结果。结果显示,MHC Dextramer的分辨率达到131,中位荧光密度达到301,而MHC Dextramer的分辨率达到373,中位荧光密度达到1104。研究结果显示,MHC Dextramer具有更高的分子检测灵敏性。


Immudex MHC Dextramer具有更高分子检测灵敏性


三、Immudex MHC Dextramer具有高度批间一致性

为了验证MHC Dextramer的实验稳定性和重复性,比较针对EBV、CMV(两种不同的肽)和流感病毒三种不同批次的MHC I Dextramer试剂,结果显示,无论何种病原肽,不同批次的MHC I Dextramer识别的抗原特异性CD8+ T细胞具有一致性。这表明Immudex MHC Dextramer具有高度的批间一致性。


Immudex MHC Dextramer具有高度批间一致性


总之,Dextramer试剂批次效应小,在检测T细胞的TCR亲和力方面显示出较高的灵敏度,加上其具有的多个荧光基团,因此具有更好的荧光分辨率,是特异免疫细胞检测分析的优势产品。


Immudex简介

Immudex成立于2009年,总部位于丹麦哥本哈根,专注于为癌症免疫治疗、移植、传染病和自身免疫领域的免疫监测提供解决方案。Immudex借助专有的Dextramer、dCODE Dextramer 技术,开发销售研究试剂和检测解决方案,包括GMP级别产品。Immudex产品按照 ISO 13485 和 21 CFR 820 定义的医疗器械质量体系要求制造,每种试剂和组合都具有高亲和力、强大的检测和灵活的实用性。Immudex 还在全球范围内提供MHC多聚体和Elispot Panel服务,可以应用于流式细胞术、原味染色、NGS以及单细胞多组学研究领域。


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