发布时间：2022/06/01 点击数：治疗性蛋白药物的免疫反应对该药物的临床表现如：药代动力学、药效学、安全性和疗效均会产生不同程度的影响。而抗药物抗体（Anti-Drug Antibody，以下简称ADA）的检测和分析是了解潜在免疫反应的有用工具。临床试验期间观察到的免疫反应信息，特别是ADA诱导的发生率或ADA反应对免疫系统的影响对于任何治疗性蛋白质产品的开发都至关重要。因此治疗性蛋白药物在进入临床试验前对ADA存在与否以及ADA水平的检测非常关键。
目前，常用的ADA免疫分析技术包括酶联免疫吸附分析（ELISA）、电化学发光法（ECLA）、放射免疫沉淀分析（RIPA）、表面等离子体共振（SPR）等。这些方法的检测灵敏度受限于检测背景以及反应性检出能力，再加上ADA检测具有复杂的生物基质（血清/血浆）、抗药物特异性抗体含量低、与药物结合亲和力差、高浓度循环药物的影响等特点给ADA免疫反应的检测带来了很大挑战，因此优化ADA免疫检测过程的灵敏度、排除干扰、降低检测背景非常迫切。
ADA检测的干扰因素
1、非特异性结合（Non-Specific Binding）
从使用的塑料制微孔板到显影剂，每种成分都可能导致非特异性结合从而影响分析灵敏度。优化方法之一是选择适当的分析缓冲液和用于防止非特异性结合的封闭剂。多种蛋白质可用作封闭剂，然而，并没有一款理想的封闭剂可以适用于所有分析。因此，需要测试几种封闭剂以优化分析性能。
2、样品基质中循环药物的影响
ADA检测会受到样品基质中循环药物的干扰，过量的药物与ADA 结合，会造成 ADA 检测假阴性结果。由于 ADA 在样品中会有两种存在形式，即游离 ADA和 ADA-药物复合物。游离的 ADA 相对比较容易检测到，而如果要检测与药物结合的 ADA，则需要对样品进行预处理，目前常用的方法之一是酸解离。酸解离是通过酸化样品将 ADA-药物复合物解离成 ADA 和药物，但这仅是在酸性条件下的存在形式，酸化后的样品需要在 pH 回到中性时方可被用于 ADA 的检测。
3、样品基质中类风湿因子的干扰
类风湿因子（RF）是以变性的 IgG 的 Fc 片段为靶抗原的自身抗体，RF 不仅可与变性的 IgG 结合，也与自身 IgG 或异体 IgG反应，常对免疫检测造成干扰。常规的处理方法是分析前在样本中加入动物血清或IgG，或加入封闭阻断试剂。
Lab bioreagents帮您应对ADA检测的挑战
ADA检测专用封闭剂和样本稀释液,兼容MSD/Luminex检测平台,降低免疫交叉反应,降低基质干扰,实现高灵敏度
Lab Bioreagents,通过人工智能 AI 技术筛选超过 2000 种化合物，同时采用动态动力学结合测试进行优化，开发了系列高品质的分析缓冲液和分析试剂盒。本组合套装是经AI系统算法获得的首推ADA检测组合（StrongBlock III封闭液+ NGB I样本稀释液），可很大程度地提高药物和抗药物抗体间的特异性亲和力，增强药物耐受性, 降低交叉反应性和基质效应，改善分析性能。
产品特点
（1）专用的ADA 样本稀释液（NGB I），偏碱性缓冲液（pH=8）可以提供酸处理之后的酸性中和反应
（2）封闭液（StrongBlock III），主要成分为物理改性和化学修饰的BSA，异性抗体阻断剂及一种专有成分，有效降低交叉反应性和基质效应，提高信噪比
（3）提高药物和抗药物抗体间的特异性亲和力，适用于低亲和力ADA检测
Lab bioreagents提供一系列高品质免疫检测Buffers，包括封闭液（StrongBlock buffer I/II/III）、药代动力学检测专用样本稀释液（LowBinding buffer III/IV/V）以及ADA检测专用样本稀释液（NGB I/II）
