01   前言

细胞保存是细胞治疗领域的重要环节，它涉及到确保细胞在保存后仍保持活力和功能。传统上，细胞保存通过将细胞置于低温环境中来实现，例如2-8°C以减缓代谢，或-196°C的液氮中以阻止生物活动。然而，这些低温环境都会导致细胞损伤，影响细胞活力和功能恢复。

02   细胞保存策略

在开发商业细胞治疗产品时，需要考虑新鲜制剂和冷冻制剂的优缺点。细胞治疗供应链主要有两种模型：

1.冷冻运输模型: 细胞在收集后进行冷冻保存，并在需要时解冻使用。这需要训练有素的医护人员和适当的设备配置。

2.新鲜运输模型: 细胞在中央制造设施中配制，并以新鲜液体的形式低温保存运输到护理中心。这减少了医护人员和设备的需求，但需要更快的交货时间和严格的物流控制。

图1 - 细胞治疗制剂的两种应用场景：冻存制剂VS新鲜制剂

03   2-8℃低温保存的挑战

许多研究表明，与室温保存相比，2-8°C 低温保存可以促进多种细胞类型的恢复和稳定性。然而，当细胞低温保存超过24小时后，通常会发生明显的活力和功能恢复丧失。因此，延长低温保存的稳定性对于细胞治疗产品十分重要。

04   研究目的

本研究旨在评估不同保存介质对 hMSCs 在 2-8°C 低温保存后的活力和功能恢复的影响，并强调使用合适的生物保存溶液的重要性。

05   实验方法

·  使用人间充质干细胞 (hMSCs) 作为模型系统。

·  测试了两种类型的保存介质：

1.含胞外存储保护剂的保存液：MSC基础培养基、Normosol-R、PlasmaLyte A、AQIX 和 Celsior。

2.含胞内存储保护剂的保存液：ViaSpan 和 HypoThermosol FRS (HTS-FRS)。

·  将 hMSCs 种植在 96 孔板中，并使用不同的保存介质进行 1-7 天的 2-8°C 低温保存。

·  保存后，评估细胞的形态、线粒体功能、活力和分化能力。

06   实验结果

图2 - 比较不同储存介质对低温储存后hMSC恢复的效果

FRS (HTS-FRS) (A)、ViaSpan(B)、Normosol-R (C)和Plasma-Lyte (D)等

图2中是MSCs分别保存在四组低温贮藏剂中在低温贮藏1天(第1行)和3天(第2行)后的形态学结果显示。图中第三行是通过荧光显微镜下F-actin (Alexa Fluor 488 phalloidin)染色;绿色)和核(Hoechst 33342;蓝色)在低温储存3天后的形态展示。

·  与其他保存介质相比，HTS-FRS 能较大幅度提高 hMSCs 的活力和功能恢复。

·  HTS-FRS 保存的 hMSCs 在低温保存后仍保持完整的细胞骨架和正常的形态。

·  HTS-FRS 保存的 hMSCs 具有更高的活细胞回收率和代谢活性。

07   结论

·  HTS-FRS 是一种有效的 hMSCs 2-8°C 低温保存介质，可提高细胞的活力和功能恢复。

·  使用 HTS-FRS 可以延长 hMSCs 的保存时间，并提高细胞的质量和安全性，从而推动细胞治疗行业的发展。

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