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病毒包装用PEI转染试剂
发布时间:2023/11/07

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Polysciences转染试剂系列是基于Polyethylenimine的产品,因其较高的转染效果,已应用于AAV、LV和重组蛋白等工业化生产。


Polyethylenimine是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在各pH下都能充当有效的「质子海绵」体 (proton sponge),因此更容易结合带负电荷的核酸分子,形成带正电荷的复合物颗粒,该颗粒与细胞表面阴离子结合,更容易通过内吞作用进入细胞,并且可抵御溶酶体的降解作用,从而提高核酸分子的表达水平。


Polysciences公司提供一系列PEI产品:研究级产品PEI MAX(cat#24765)和Transporter 5(cat#26008),以及cGMP 级产品 MAXgene GMP(cat#26435/26406),适合于各个规模AAV、LV病毒载体和重组蛋白的生产。


PEI MAX是一款高度浓缩的粉剂,多数科学家选择PEI MAX,在内部自行制备成本更低、效益更高的转染试剂。多年以来,经过众多业内人士评审的公开研究和出版文献表明,在HEK293、CHO和Sf9系统中可获得更高的转染效率,在重组抗体和病毒载体生产中稳定性更高、可靠性更强。PEI MAX是一种非GMP等级转染试剂,适用于基础科学研究及药物研发早期阶段。


PEI MAX 40K是线性Polyethylenimine盐酸盐形式,是线性PEI 25K的升级产品。相比于PEI25K,PEI MAX 40K具备以下特点:

1、水解形式(去乙酰化);

2、盐酸盐形式,具更高的水溶特性;

3、含更长连续性片段,其质子化氮水平比PEI 25K提高11%以上。


Transporter 5转染试剂是一种即用型线性PEI衍生物,是由PEI MAX配置而成的即用型无菌试剂,采用0.1μm PES无菌过滤器,更好地消除支原体污染风险,适用于工艺开发、临床前和早期临床研究,可无缝过渡到MAXgene用于cGMP生产。


MAXgene GMP (cat# 26406/26435) 是一种cGMP转染试剂,在Polysciences研究等级转染试剂(PEI MAX 或 Transporter 5)的效率和可扩展性基础上增加了验证工艺和监管流流程,适用于细胞和基因治疗病毒载体的研发和生产。


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1、高度可重复性

Polysciences 的线性PEI被引用,PEI MAX和Transporter 5被设计用于病毒载体研发和工艺开发过程,对于临床试验和商业化,polysciences推荐使用MAXgene GMP,它有粉末和液体两种形式,满足基因/细胞治疗原料的质量和监管要求。这三种产品都是水溶性的,易于操作且提供更高的转染效率。


Polysciences PEI产品不同批次保持高度一致性


3个不同批次的PEI转染试剂将表达GFP的质粒转染到悬浮HEK-293T细胞中,转染后48h,通过流式细胞术检测转染效率,结果表明,3个不同批次的PEI的转染效率没有较大差异。


2、低细胞毒性

转染后的细胞状态极大的影响着产毒量,选择适合的转染试剂能够减少因转染试剂导致细胞受损造成的细胞产毒能力不足。Polysciences转染试剂具备效率更高的转染能力,同时兼顾低毒性,能够有效避免对细胞的损伤。



三个不同批次的MAXgene GMP转染悬浮HEK-293T细胞表达单抗,使用VI-CELL细胞计数仪检测转染后24h和48h的细胞活性。数据显示,各细胞的活力均在90%以上,表明3个不同批次的均保持低毒性,且保持批次间一致性。

 

3、高滴度

优化各protocol参数以产生效率更高的生产工艺较为重要,需要选择适合的转染试剂,因为它对整个过程和产品的收率有较大影响。


研究发现,使用polysciences的PEI转染试剂,转染效率更高,细胞毒性更低。PEI MAX几乎去乙酰化,这有助于提高转染效率,同时使其成为一种细胞毒性更小的转染试剂,也有研究证明利用PEI MAX在大型生物反应器中可以获得高滴度的AAV。


Polysciences PEI MAX产生高滴度AAV病毒


Polysciences PEI MAX转染悬浮HEK293细胞生产rAAV8CMV-eGFP),转染后48h72h96h分别收样,检测rAAV8的产量,结果表明随着时间的增加,表达量逐渐增加,其中96hrAAV8滴度达到约1E12vg/ml


4、可拓展性和灵活性

PolysciencesPEI转染试剂适用于各种细胞系和细胞类型。稳定和瞬时转染皆可用,在贴壁和悬浮培养中均可产生高产量病毒/蛋白。


由于许多病毒/蛋白的制造工艺使用HEK293细胞和CHO细胞,这里77779193永利提供了polysciences PEI和竞争对手的PEI在这两种细胞中的性能比较数据。


Polysciences PEI转染试剂产生更高的抗体


在相同实验参数下,与竞争对手PEI相比,Polysciences PEI转染试剂能够产生更高产量的抗体。


注:我司为Polysciences官方授权中国总代理,如需更多技术支持,请与我司联系。


详细产品信息:/Polysciences-chemicals/


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